배경기술
카그릴린타이드는 오래 지속되는 새로운 아실화 아밀린 유사체입니다. 아밀린 수용체(AMYR)와 칼시토닌 G 단백질 결합 수용체(CTR)의 비선택적 작용제로 38개의 아미노산으로 구성된 고리형 폴리펩티드입니다. 그 서열에는 38개의 아미노산과 한 쌍의 이황화 결합이 포함되어 있습니다. Cagrilintide는 체중과 음식 섭취량을 크게 줄일 수 있으며 비만 연구에 잠재력을 가지고 있습니다. 아밀린은 GLP-1 신호 전달 경로 외부의 배고픔과 포만감과 관련된 또 다른 호르몬입니다.
카그릴린타이드는 에너지 섭취를 줄이고, 음식 선택과 선호도를 조절하며, 인슐린과 함께 분비되어 포도당 조절 효과를 발휘하고, 식후 글루카곤 방출을 억제하고, 위 배출을 지연시킬 수 있습니다. 당뇨병, 비만, 대사증후군, 심혈관 질환 및 기타 측면의 치료에 분명한 이점이 있으며 수요와 응용 전망이 넓습니다.
카그릴린타이드의 화학 구조식
기본정보
영어N아메：카그릴린타이드
회사번호：GT-F064
카스：1415456-99-3
S순서：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2(Disulfidebridge:cys4-cys9)
M분자의F공식：C194H312N54O59S2
M분자의무게：4409.01
사용되는 원료카그릴린타이드
합성 경로
카그릴린타이드 준비 다이어그램
(1)준비카그릴린타이드펩타이드 수지
첫 번째 보호된 아미노산 1.5mmol과 HOBT 1.5mmol을 취하여 적당량의 DMF에 용해시키고 0~15°C로 냉각합니다. DIC 1.5mmol을 추가로 취하여 보호된 아미노산의 DMF 용액에 교반하면서 천천히 첨가하고 반응물을 0~15°C에서 10분간 교반하여 활성화된 보호된 아미노산 용액을 얻고 따로 보관합니다.
0.5mmol의 아미노수지(치환도 0.42mmol/g)를 취하여 DMF용액으로 60분간 팽윤시키고, 20% Pip/DMF용액으로 30분간 탈보호한 후 세척하고 여과하여 반응하는 수지를 얻는다.
반응할 수지에 활성화된 1차 보호아미노산 용액을 첨가하고 25~35℃에서 120~300분간 커플링 반응을 수행한 후 여과, 세척하여 1개의 보호아미노산을 함유한 수지인 Fmoc-Pro-Resin을 얻는다.
위와 동일한 방법을 사용하여 위에서 언급한 해당 2~38번째 보호된 아미노산 또는 단편에 순차적으로 접근합니다.:Fmoc- Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-글리-OH，Fmoc-발-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，모노-tert-부틸 에이코산디오에이트, 4.98 g의 카메글립틴 펩티드 수지를 생성함
(2)원유의 준비카그릴린타이드 선형 펩티드
카르필조밉 펩타이드 수지 4.49g을 취하여 TFA 혼합용액을 첨가하며, 혼합용액의 비율은 TFA:EDT/Tis/페놀/H2O = 87.5:2.5:5:2.5:2.5이고, 투여량은 수지 1g당 8ml이다. 20~30°C에서 3시간 동안 반응물을 교반하고, 반응 혼합물을 샌드 코어 깔대기로 여과하고, 여액을 수집하고, 수지를 소량의 TFA로 3회 세척하고, 여액을 합하고, MTBE를 첨가하여 침전시키고, 침전물을 MTBE로 3회 세척하고, 펌프 건조하여 황백색 분말을 얻었는데, 이는 조 선형 카르필조밉 펩티드 2.08g이다.
(3)조카그릴린타이드 고리형 펩티드 용액의 제조
선형 조잡한 0.50g을 섭취하십시오.C아그릴린타이드 펩타이드를 5.0 mg/ml 농도로 선형 펩타이드 조액으로 제조하고 DMSO 용액 5 ml를 교반하면서 적가한 후 20~30℃에서 20시간 동안 반응시켜 고리형 카그릴린타이드 펩타이드 조액을 얻는다.
(4)세련된 준비C아그릴린타이드 펩타이드
원유를 가져 가라C아라글리타이드 고리형 펩티드 용액을 첨가하고 이를 0.45μm 혼합 미세다공성 필터막으로 여과합니다.；
고성능 액체크로마토그래피를 이용하여 정제, 제조하고 수집한 물질C아라글립틴 분획；
완충액 교환에는 고성능 액체 크로마토그래피가 사용되었습니다. 완충액 교환 후 주요 피크를 수집하고 분석 액체 크로마토그래피를 통해 순도를 검출했습니다. 완충액 교환 후의 주요 피크 용액을 합하고, 감압 농축하여 카보타이드 아세트산 수용액을 얻고 이를 동결건조하여 순도 99.58%, 최대 단일 불순물 0.09%, 총 수율 31.87%, 분자량 4409.0의 정제된 카보타이드 152.18mg을 얻었다.
HPLC 도표
MS 다이어그램
상기 실시예를 보면, 단계별 커플링 합성 공정과 비교하여, 본 발명에서 제공하는 방법으로 얻은 생성물은 순도가 99.0% 이상이고, 단일 불순물이 각각 0.1% 미만으로 나타나 생성물의 품질과 전체 수율이 향상되는 것을 알 수 있다. 공정이 간단하고 제어가 용이하며 산업화 수준이 높고 실용 가치와 응용 전망이 넓습니다.
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