5-아미노플루오레세인

5-아미노플루오레세인(5-AF 또는 플루오레세인아민이라고도 함)은 형광 표지 시약으로 널리 사용됩니다. 5-아미노플루오레세인의 1차 아민은 카르복실기(EDC/NHS 활성화를 통해), 알데히드, 케톤 또는 활성화된 에스테르(예: NHS 에스테르)와 반응하여 안정적인 아미드 또는 이민 결합을 형성할 수 있습니다. ~490nm(붕산염 완충액 pH 8.5에서 λmax = 496nm)에서 여기 최대값과 ~515nm에서 방출 최대값을 나타내며, 우수한 광안정성과 약 40nm의 스톡스 이동을 갖춘 밝은 녹색 신호를 제공합니다. 형광 강도는 pH에 따라 달라지며, 알칼리성 조건(pH 8~9)에서 특히 증가하는데, 이는 아미노기의 양성자화 상태 변화에 기인합니다.

5-아미노플루오레세인은 단백질 및 항체 라벨링에서부터 표적 약물 전달 시스템 및 형광 센서 구축에 이르기까지 생물학 및 의학 연구에서 광범위하게 사용됩니다. 5-아미노플루오레세인은 또한 단백질 표지에 가장 널리 사용되는 시약 중 하나인 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC 이성질체 I) 합성의 핵심 중간체입니다.

제품 매개변수

준비 및 보관 참고 사항

5‑AF는 일반적으로 4-니트로프탈산에서 시작하여 환원(예: 히드라진/FeOOH 사용) 및 메탄술폰산에서 레조르시놀과 축합하여 합성됩니다. 조 생성물은 5개 이성질체와 6개 이성질체의 혼합물이며 결정화를 통해 분리됩니다. 현대적인 방법(전자레인지 보조 또는 효소)은 수율을 향상시키고 부산물을 줄일 수 있습니다. HPLC를 통한 최종 정제는 ≥95% 순도를 보장하며 구조는 NMR 및 MS로 확인됩니다.

보관 – 이 화합물은 빛, 공기 및 습기에 민감합니다. 밀봉된 아르곤 퍼지 용기에 담아 4°C 암실에서 보관하세요. 장기 보관(6개월 초과)의 경우 분말 상태로 -20°C를 권장합니다(최소 3년 동안 안정적). DMSO 용액은 -80°C에서 6개월, -20°C에서 1개월 동안 보관할 수 있습니다. 반복적인 동결-해동 주기를 피하십시오. 빛과 습기로부터 보호되는 경우 주변 온도에서 운송하는 것이 허용됩니다.

자주 묻는 질문(FAQ)

Q1: 5‑Aminoflurescein(5‑AF)과 FITC의 차이점은 무엇입니까? 어떻게 선택하나요?

A: 둘 다 녹색 형광 염료이지만 반응성 그룹이 다릅니다.

● 5‑AF에는 1차 아민(–NH2)이 포함되어 있습니다. 접합 전에 대상의 카르복실기 활성화(EDC/NHS 사용)가 필요합니다. 이미 카르복실기를 포함하는 분자를 라벨링하는 데 가장 적합합니다.

● FITC에는 표적의 아민(예: 단백질의 라이신 잔기)과 직접 반응하는 이소티오시아네이트 그룹(-N=C=S)이 있어 사전 활성화가 필요하지 않습니다. FITC는 일상적인 단백질 라벨링에 더 편리합니다.

● 특정 방향의 접합(예: 카르복실 핸들을 통해)이 필요하거나 맞춤형 형광 유도체를 합성하려는 경우 5‑AF를 선택합니다. FITC는 일반적으로 직접 항체 라벨링에 더 간단합니다.

Q2: 5‑AF로 생체분자를 라벨링하기 위한 일반적인 반응 조건은 무엇입니까?

A: 가장 일반적인 방법은 아미드 커플링입니다. EDC 및 NHS(MES 또는 PBS 완충액, pH 5.5~6.5)를 사용하여 표적 분자의 카르복실기를 활성화한 다음 5‑AF를 추가하고 pH 7.5~8.5로 조정합니다. 실온 또는 37°C에서 2~4시간 동안 배양합니다. 알데히드 함유 표적(예: 당단백질)의 경우 나트륨 시아노보로하이드라이드를 사용한 환원성 아민화를 사용합니다. 반응하지 않은 염료는 탈염이나 투석을 통해 제거할 수 있습니다. 5:1~20:1의 염료-단백질 몰비가 좋은 출발점이 됩니다.

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